日前液體乳產品中發現黃曲霉毒素M1超標，引發公眾廣泛關注。黃曲霉毒素檢測常見的方法為經免疫親和柱凈化后，采用HPLC（高效液相色譜法）、TLC（薄層層析法）、LC-MS/MS（液質聯用）檢測以及ELISA（酶聯免疫）法。其中ELISA法使用較為普遍，但因其定量不準確，只能作為陽性樣品的初篩工具。LC-MS/MS檢測因其具有靈敏度高、快速、準確的特點，廣泛應用于食品安全檢測。

　　AB SCIEX一直致力于為用戶提供全方位的解決方案，在事件爆發的第一時間建立高效液相串聯質譜法測定黃曲霉毒素的整體解決方案。

　　1.樣品前處理方法

　　適用于乳和乳制品中黃曲霉毒素的測定。

　　⑴提取方法：

　　①乳：

　　稱取50g（精確至0.01g）混勻的試樣，置于50mL具塞離心管中，在水浴中加熱到35℃～37℃。在6000轉/分鐘下離心15min。收集全部上清液，供凈化用。

　　②發酵乳（包括固體狀、半固體狀和帶果肉型）：

　　稱取50g（精確至0.01g）混勻的試樣，用0.5mol/L的氫氧化鈉溶液在酸度計指示下調pH值至7.4，在9500轉/分鐘下勻漿5min，在水浴中加熱到35℃～37℃。在6000轉/分鐘下離心15min。收集全部上清液，供凈化用。

　　③乳粉和粉狀嬰幼兒配方食品：

　　稱取10g（精確至0.01g）試樣，置于250mL燒杯中。將50mL已預熱到50℃的水加入到乳粉中，用玻璃棒將其混合均勻。如果乳粉仍未完全溶解，將燒杯置于50℃的水浴中放置30min。溶解后冷卻至20℃，移入100mL容量瓶中，用少量的水分次洗滌燒杯，洗滌液一并移入容量瓶中，用水定容至刻度，搖勻后分別移至兩個50mL離心管中，在6000轉/分鐘下離心15min，混合上清液，用移液管移取50mL上清液供凈化處理用。

　　④干酪：

　　稱取經切細、過10目圓孔篩混勻的試樣5g（精確至0.01g），置于50mL離心管中，加2mL水和30mL甲醇，在9500轉/分鐘下勻漿5min，超聲提取30min，在6000轉/分鐘下離心15min。收集上清液并移入250mL分液漏斗中。在分液漏斗中加入30mL石油醚，振搖2min，待分層后，將下層移于50mL燒杯中，棄去石油醚層。重復用石油醚提取2次。將下層溶液移到100mL圓底燒瓶中，減壓濃縮至約2mL，濃縮液倒入離心管中，燒瓶用乙腈-水溶液（1 4）5mL分2次洗滌，洗滌液一并倒入50mL離心管中，加水稀釋至約50mL，在6000轉/分鐘下離心5min，上清液供凈化處理。

　　⑤奶油：

　　稱取5g（精確至0.01g）試樣，置于50mL燒杯中，用20mL石油醚將其溶解并移于250mL具塞錐形瓶中。加20mL水和30mL甲醇，振蕩30min后，將全部液體移于分液漏斗中，待分層后，將下層溶液全部移到100mL圓底燒瓶中，在旋轉蒸發儀中減壓濃縮至約5mL，加水稀釋至約50mL，供凈化處理。

　　⑵凈化方法

　　①免疫親和柱的準備：

　　將一次性的50mL注射器筒與親和柱上頂部相串聯，再將親和柱與固相萃取裝置連接起來。

　　②試樣的純化：

　　將上述樣品提取液移至50mL注射器筒中，調節固相萃取裝置的真空系統，控制試樣以2mL/min～3mL/min穩定的流速過柱。取下50mL的注射器筒，裝上10mL注射器筒。注射器筒內加入水，以穩定的流速洗柱，然后，抽干親和柱。脫開真空系統，在親和柱下部放入10mL刻度試管，上部裝上另一個10mL注射器筒，加入4mL乙腈，洗脫待測物，洗脫液收集在刻度試管中中，洗脫時間不少于60秒。然后用氮氣緩緩地在30℃下將洗脫液蒸發至近干（如果蒸發至干，會損失待測物），用乙腈-水溶液（1 9）稀釋至1mL。

　　2.LC-MS/MS儀器條件

　　①液相色譜參數：

　　色譜柱：PhenomenexLunaPFP（2）3µm，100Å，50×2mm

　　柱溫：28℃

　　流動相：含0.1%甲酸，甲醇/5mM乙酸銨水溶液（60:40）

　　流速：0.4mL/min

　　進樣量：10µL

　　運行時間：3min

　　②質譜參數：

　　以下參數以API3200為例，具體參數和檢測靈敏度視儀器不同而有差異。

　　離子源參數：

　　CUR： 20 psi

　　IS： 5500 V

　　TEM： 425°C

　　GS1： 30 psi

　　GS2： 60 psi

　　Ihe： On

　　CAD： High

　　實驗結果

　　黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2和M1提取離子流圖如下：

　　結論

　　AB SCIEX提供的全方位解決方案，可同時測定乳及乳制品中B1、B2、G1、G2和M1共5種黃曲霉毒素。

　　AB SCIEX公司提供免費下載的用于測定黃曲霉毒素的iMethod，在Cliquid軟件中安裝后可直接使用。